采用基因工程的方法，将人白细胞介素－24基因克隆至腺病毒穿梭质粒载体中，通过限制性内切酶图谱法鉴定人白细胞介素－24基因是否重组到腺病毒穿梭质粒载体中。
（4） 重组人白细胞介素－24腺病毒的构建
通过脂质体转染技术，将携带人白细胞介素－24基因腺病毒穿梭质粒载体转染293细胞（人胚肾细胞），提取重组腺病毒DNA进行PCR鉴定。
（5） 扩增前重组人白细胞介素－24腺病毒的空斑筛选
利用噬斑纯化方法，将感染重组腺病毒的293细胞进行培养，挑选出单个重组腺病毒，以保证扩增的纯度和稳定性。
（6） 重组人白细胞介素－24腺病毒的扩增、纯化
将经噬斑纯化获得重组腺病毒大量感染293细胞，以大量生产重组腺病毒。待感染病毒的293细胞成熟后收获细胞，经反复冻融及离心等方法，除去细胞碎片，收集上清，获得重组腺病毒。并通过超滤和离子交换的方法来纯化和浓缩重组腺病毒，从而获得大量、高滴度、高纯度的重组人白细胞介素-24腺病毒样品。
1.2、 重组人白细胞介素-24腺病毒注射液的质量控制和检测方法的建立
参照国家«人基因治疗研究和制剂质量控制技术指导原则»、«中国生物制品规程»、«中国药典»（2000年版）等要求建立重组人白细胞介素-24腺病毒注射液的质量控制和检测方法。着重对重组人白细胞介素-24腺病毒制品的病毒的纯度、病毒滴度的测定和复制型病毒（RCA）、腺相关病毒检测的方法学研究。
（1）比活性：病毒比滴度=病毒感染滴度/病毒颗粒数测定
（2） 复制型病毒（RCA）的检测：A549细胞检测法，每3.0×1010VP中应不高于1RCA（即≤1RCA/3.0×1010VP）
（3）腺相关病毒的检测
采用PCR法，应无腺相关病毒（AAV）的污染。
（4） 病毒纯度检测
采用高效液相色谱法或A260/A280法 纯度大于95%。
1.3 重组人白细胞介素-24腺病毒注射液的抗肿瘤实验
将重组人白细胞介素-24腺病毒注射到肿瘤细胞，观察重组人白细胞介素-24腺病毒抗肿瘤效果。
2、本企业在生产场地、公用工程、辅助设施等方面已具备的条件和需新增加的基本建设内容。
我单位有研究开发基因药物的专业性生物技术研究所，有着从事多年生物技术药物研究和开发经验，曾研制出“注射用重组人白介素-2（125Ser）、注射用重组人白介素-18、α-2b干扰素口含片、新型溶栓酶”等高科技生物药品，具有良好的科研基础。配备有较完善的科研生产检测仪器和设备：DNA合成仪、PCR扩增仪、70L贝克曼的发酵罐、发玛西亚的蛋白层析系统、Waters的高效液相、万级净化级别的实验室等。现有生物药品GMP生产车间和两条生物药品生产线，具备良好的生产条件。
3、述生产过程中“三废”排放、“三废”处理的措施和生产过程中职业危害因素分析及采取的保护措施方案。
重组人白细胞介素-24腺病毒注射液研制和生产过程，无三废排放。
4、特殊行业许可证报批情况
我单位企业法人营业执照（执照号：3700001806768）、药品生产企业许可证（证号：鲁01Sz20**0020）和药品GMP证书（证书编号：C1064）等证照齐全。
5、说明本项目推广应用计划和保障措施
（1）本项目研制成功后，我单位自行生产。
（2）本单位有一座4000m2 GMP标准的生物药品生产车间，具有完备的生产仪器、设备，年生产能力可达上千万支生物制剂。
（3）本单位有专业销售公司，销售网络遍布全国30多个省市自治区，本项目产业化后即可上市推广。
（4）该项目有着巨大的社会意义和经济效益，公司对该项目极为重视，不但组织了科研能力较强的专职研究队伍，加大资金的投入，而且组织了由5位国内著名院士、6名知名专家组成的专家组，对“重组人白细胞介素－24注射液”基因治疗项目进行了论证指导，保证了本项目的可行性。
七、年度计划内容：
本项目计划为三年
20**年1月-20**年6月 载体的构建 经费投入预计 300万元
20**年7月-20**年12月 载体的鉴定 经费投入预计 100万元
20**年1月-20**年6月 重组腺病毒的扩增纯化 经费投入预计 100万元
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